综合临床和细菌学检查的某些特点可考虑该病的诊断。
细菌培养：所有标本均应作革兰氏染色和需氧培养，厌氧培养应置于特殊的培养基，孵育48~72小时，然后检查，可能初次培养后≥1周还得不到易感性资料。
标本涂片检查：在对标本作厌氧菌培养的同时进行涂片镜检，可早期把有厌氧菌生长的信息提供给临床，如普通需氧培养无细菌生长，但直接涂片见到大量细菌者，即可考虑为厌氧菌感染;如普通培养只有一种细菌生长但直接涂片可见两种或以上细菌者，可考虑患者为混合感染。
厌氧菌药敏试验：厌氧菌药敏试验应该是严格的，需经国家临床检验标准指导委员会确认。但若菌种是已知的，则药敏情况可预先推测,因此很多实验室不作常规的厌氧菌药敏试验。
细菌染色：若感染部位的脓液革兰氏染色显示出混合的多形性菌群，则可考虑厌氧菌感染。由于革兰氏染色很难发现拟杆菌，故必须仔细观察特征性的变化不一的丝状杆菌。若感染部位取材作革兰染色显示为混合菌群，而明显坏死的组织培养仅见α-溶血性链球菌或单一的需氧菌如大肠杆菌，或甚至无细菌生长，则应考虑到可能是标本的运送或培养的细菌学技术不当之故。
二、鉴别
混合性厌氧菌感染主要与需氧菌相鉴别，通过细菌培养可资鉴别。普通培养只有一种细菌生长但直接涂片可见两种或以上细菌者，可考虑患者为混合感染。
厌氧菌感染：绝大多数属内源性。这些细菌是一种条件致病菌，必须在全身或局部抵抗力下降时才能发生侵入和感染。厌氧菌的鉴定可选用API 20A、VITEK-ANI、MICRO-01D、气液色谱仪等设备鉴定。厌氧菌的药敏试验大部分实验室采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的琼脂稀释法。
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