蛲虫感染可通过发现蛲虫而确诊，即在儿童夜间入睡后1～2小时检查其肛门，这是最好的诊断方法。虫体肉眼可见，白色、细如毛发、可活动。对较大患儿，可在其清晨未醒时用透明胶带粘附，可以在患儿肛门附近的皮肤皱褶中粘得虫和虫卵，然后将胶带粘面对折并交给医生检查。胶带上的虫和虫卵可以在显微镜下得到证实。
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