诊断检查：
(一)首要检查
1.血清25-(OH)D3和1，25-(OH)2D3的浓度 这两项指标是诊断佝偻病的敏感可靠指标，而且在佝偻病的早期，这两项指标已经下降，可以早期诊断佝偻病。但是，此项检查昂贵，不能普及。
2.血清骨碱性磷酸酶 是目前检查和诊断佝偻病的常用指标，灵敏特异简便快速，目前已经代替了传统的“佝偻病三项”(血钙、血磷和血碱性磷酸酶)，成为早期诊断佝偻病主要辅助检查。虽然，骨碱性磷酸酶没有血清25-(OH)D3和1,25-(OH)2D3灵敏和特异，但基本可以满足临床诊断佝偻病的要求。正常值范围：≤200U/L。
3.佝偻病三项(血钙、血磷和血碱性磷酸酶) 是传统的检查方法，在没有开展骨碱性磷酸酶检查之前，是诊断佝偻病主要辅助检查。缺点是不够灵敏，不能早期发现佝偻病，往往要等到病情很严重才能发现。佝偻病时通常血钙下降，血磷下降，血碱性磷酸酶升高。
4.X线检查 最常见的现象是骨质疏松、骨密度下降、骨骼畸形和骨折、骨皮质变薄。约1/3的骨软化患者X线可见骨膜下侵蚀及指骨纹理增强现象。也有的骨软化症患者X线图象完全正常，没有骨改变表现。
(1)长骨骨骺端X线平片发现长骨骨骺端佝偻病的特异X线表现，早期X线长骨骺部钙化预备线模糊;激期钙化预备线消失、骨骺端增宽、骺端呈杯状或毛刷状改变，骨质稀疏、骨干弯曲变形或骨折。
(2)X线骨龄摄片发现骨龄落后。
(二)次要检查
尿钙测定也有助于佝偻病的诊断，尿中碱性磷酸酶的排泄量增高。分析诊断。
鉴别诊断：
维生素D缺乏性佝偻病需与以下疾病进行鉴别。
1.甲状腺功能减退症 出生后2~3个月即出现甲状腺功能不足表现，如生长发育迟缓、出牙延迟、前囟宽大、闭合延迟，但患儿智力低下，有特殊外貌，体温低及大便秘结，血清钙、磷正常，X线见骨龄虽较正常同龄儿迟，但钙化正常。血清TSH测定可资鉴别。
2.软骨营养不良 头大、前额突出、长骨骺端膨出、肋骨串珠、腹部膨隆等与佝偻病相似，但四肢及手指粗短，五指齐平，腰椎前凸，臀部后凸，血清钙、磷正常。
3.远端肾小管性酸中毒 可出现佝偻病表现，但患儿畸形显著，身材矮小，有代谢性酸中毒，排碱性尿(尿pH>6)，血钙、血磷、血钾均低，血氯高，2~3岁后仍有活动性佝偻病表现应考虑本病。
4.肾性佝偻病 因先天或后天原因引起慢性肾功能障碍所致。钙、磷代谢失调，血钙低，血磷高，有继发性甲状旁腺功能亢进、骨质普遍脱钙、骨骼呈佝偻病表现。
5.原发性甲状旁腺功能亢进症 在婴儿和儿童极为少见。长骨骨干均有囊样稀疏改变，再结合血液生化检查，有高血钙可予区别。
6.抗癫痫药物引起的佝偻病 长期口服抗癫痫药物如苯巴比妥钠、苯妥英钠等，可引起低钙血症。可根据病史相鉴别。
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