HIV感染
1.抗HIV-1和抗HIV-2的检测:
间接法的酶联免疫吸附试验用于初筛检测。试验方法要求敏感性高,不能出现假阴性,但允许有少量的假阳性,为此应挑选质量好的试验盒。最近又发展了快速简便的检测方法,如明胶颗粒凝集法、乳酸凝集法、快速全血凝集法等,这些方法只需数分钟就可得结果,其操作简便,步骤简单,不需要特殊仪器设备,结果易于判断,对数量大的检测较合适。日前有文献报道,不仅从感染者血清中检测到抗体,也从尿和唾液中检测到抗HIVlgG。最近还有报道检测抗HIV IgA亦有助诊断。目前各种试验盒均同时能测抗HIV-1和抗HIV-2,常用方法如下述。
(1)颗粒凝集法:方法简单,适用于大批量初检,是将提纯的HIV抗原包被在红细胞或明胶颗粒上,制成致敏颗粒,当被检血清中有抗HIV存在时,即可与致敏颗粒起凝集反应,可判断为阳性结果,无凝集者为阴性。此法操作简单,结果出现快,不需任何仪器设备,但敏感性和特异性较酶联免疫差。
(2)酶联免疫法:其原理是将HIV抗原包被在96孔板上或其他固相载体上,其原理是将HIV抗原包被在96孔板上或其他固相载体上,加入特检血清,如血清中有抗HIV则与之结合,经洗涤后加入酶酶抗人球蛋白IgG,再加入底物,用显色显判定血清中是否有抗HIV抗体。此法敏感性高,但容易出现假阳性结果,故阳性者需用其他试剂盒重复做一次,如两次均为阳性,则可判为阳性或进一步作蛋白印迹法确诊之。
(3)免疫荧光法:是将HIV感染的细胞作为抗原固定于玻片上,其上加入不同稀释度的待检血清,经孵育后洗涤,再加荧光标记的抗人IgG,在荧光显微镜下检查,见细胞内有荧光标记者为阳性结果。此法敏感性高,但存在非特异性,且需要熟练的技术员来判定结果。
(4)蛋白印迹法:
①原理:HIV经粉碎后,其不同蛋白成分在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,按其蛋白分子大小排列于凝胶上,形成若干条特异的HIV蛋白区域,经印迹技术被转录于硝基纤维膜上,用适当浓度的不相关蛋白封闭非特异蛋白部位后,再与待血清孵育抗HIV特异蛋白抗体与其对应的蛋白相结合,经洗脱除去非特异结合的血清成分,通过酶标抗人IgG和底物显色,出现有颜色的条带,然后根据不同带型为诊断提供较正确的信息,临床用来判断是否存在HIV感染。
②蛋白印迹法判断的标准:美国疾病控制中心确认标准为P24、gp41、gp120、gp160中出现2条以上阳性,即可判断为阳性。
世界卫生组织确认阳性标准(1988年)为1条cnv带加1条pol带;或1条env带加1条gag带;或2条env带为阳性时,均判为确认试验阳性。
根据卫生部90-2号文件,我国的阳性确认标准为至少有1条env(gp160、g0120、g041)带和l条pol(p65、p51、p32)带;或至少有1条env带和1条gag(p55、p24、p18)带;或至少有1条cnv带、1条gag带和1条pol带;或至少2条env带。
阴性者无病毒特异带。
可疑的是:1条gag带和1条pol;或只有gag带;或只有pol带。
2.抗原检测
(1)病毒分离:是一种可靠的确定病毒存在手段,但操作复杂,需时较长,且需有P3实验室才能进行。
(2) P24抗原的检测:是用鼠的抗ⅢVP24的单克隆体制备的,待检血清中有P24就可与之结合,经酶标检测可鉴别阳性或阴性。
(3) HIV RNA的检测:这是近年来最新的进展,是用PCR法检测的,目前国内尚无这类试验盒,有赖进口,价格昂贵。HIV RNA在HIV/AIDS患者体内量的多少直接反映病情,如增加很快不管是HIV或AIDS患者均需开始用药,可联合用逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂,将使病毒在体内的数量下降,存活期延长,并减慢HIV进展至AIDS。
3.其他实验室的检查
(1)CD4细胞的计数:
①流式细胞仪检测CD4和CD8总数。
②酶标记抗CD4和CD8来检测血中的CD4和CD8计数。
(2)其他机会感染病原或抗体的检测
①卡氏肺孢子虫的检查:可收集痰或支气管分泌物、支气管灌洗液,或肺活检制成涂片或切片,用姬姆萨或苏木素-伊红染色找卡氏肺孢子虫或滋养体。
②隐孢子虫检查:从大便涂片中找隐孢子虫。
③真菌的检查:直接涂片检查可见特殊的真菌孢子和菌丝,对隐球菌可取脑脊液涂片用墨汁染色,最特异的是可见隐球菌有芽生。
④弓形体、病毒性肝炎及巨细胞病毒等抗体的检测:可用ELISA或EIA法分别检查。
⑤细菌的检测:对结核杆菌可取痰、脑脊液作涂片,然后用抗酸染色检查。其他细菌可分别作血或分泌物培养。
⑥淋巴瘤或卡波济肉瘤:要取活检送病理做切片检查。
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