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获得性血友病的诊断

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　　一、检查

　　1、激活的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和血小板功能检查当APTT延长、PT和血小板功能正常时应考虑有无自身抗体存在，是检查自身抗体的筛选试验。

　　2、血浆混合试验：当仅有APTT延长时，应进行血浆混合试验测定APTT以确定抗体的存在。如APTT仍延长5s或以上为抗体存在。当内凝血途径某一因子(FⅫ、FⅪ、FⅨ、FⅧ)缺乏时，正常血浆与患者血浆等量混合可纠正延长的APTT;但是，当有抗体存在时，等量血浆混合后延长的APTT、不能得到纠正。对于低滴度抗体，需将患者血浆与正常血浆在37℃共同孵育1～2h，以增强自身抗体对FⅧ的作用(以时间和温度依赖的方式)。因为高滴度的FⅧ自身抗体能非特异性地抑制内凝途径中的凝血因子(FⅨ、FⅪ、FⅫ)，所以需要把患者血浆系列稀释并与未稀释的正常血浆混合进行试验。由于抗体被稀释，FⅫ、FⅪ、FⅨ的活性正常，而FⅧ:C仍被抑制。

　　3、Bethesda试验：一旦确定存在自身抗体，就应对抗体进行定量以评估出血的严重程度和危险性。常用的方法是Bethesda法，即检测患者血浆灭活正常血浆中FⅧ的能力。一个Bethesda单位定义为检测体系中剩余FⅧ活性为50%时的患者血浆稀释度。但是，该方法缺乏敏感性尤其是当抗体为低滴度时。此外，Bethesda法是为检测在HA患者中出现的同种抗体而建立的，用于AH患者检测自身抗体不是一个理想的方法。但是，用此法进行自身抗体的定量对低滴度自身抗体患者出血的严重性仍有预测作用。

　　4、改良Bethesda试验：即将患者血浆与缓冲液稀释后的正常人血浆共同温育以保证体系pH值的恒定，同时将缓冲液稀释后的正常人血浆与乏FⅧ血浆一起温育作为对照。改良法提高了敏感性，尤其适合用于低滴度抗体的检测。因此，被推荐为检测抑制性抗体的首选方法。但是，与Bethesda法一样，该法不能检测非抑制性FⅧ抗体，所用的缺如FⅧ的血浆中不应有FⅧ抗体;同时对照和混合的血浆应是同一来源。

　　5、ELISA法：用重组FⅧ包被，4℃过夜;鱼胶封闭非特异性位点，加入经稀释的患者血浆并37℃孵育;再加入辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG，四甲基二氢氯化联苯胺(TMB)作为发色底物，盐酸终止反应，450nm处测吸光度(A)。该方法能检测所有抗FⅧ抗体，包括抑制性和非抑制性的自身抗体和同种抗体。其敏感性是Bethesda法的10倍。但是，该法在检测时用作标准抗原的FⅧ来源对抗体检出的敏感性有很大影响，用重组FⅧ做抗原时检出率最高;用血浆来源的FⅧ因含高水平的血管性血友病因子(vWF)，检出率最低。所以临床上在检测FⅧ抗体时应用重组FⅧ做抗原。

　　6、免疫沉淀法(IP)：患者稀释血浆与125I标记的FⅧ分子的A1、A2、C2、轻链片段共同孵育后，再加入蛋白G-sephrose结合的磁珠;用计数仪测定结合的放射活性;结果表示为免疫沉淀单位/ml，计算公式为：1-(结合放射活性/总放射活性一背景放射活性)血浆稀释倍数16、7。该方法的敏感性和特异性与ELISA相同，也能检测所有抗FⅧ抗体，包括抑制性和非抑制性的自身抗体和同种抗体。临床上，在检测FⅧ抗体时应同时进行Bethesda和ELISA法或IP法检测。

　　7、FⅧ：C检测一期法不能判定FⅧ：C减低是因FⅧ自身抗体还是狼疮抗凝物质引起。二期法则可鉴别，因在狼疮抗凝物质存在时FⅧ：C水平正常或甚至增加;也可用血小板中和试验或稀释的RVVT来鉴别。

　　根据病情，临床表现、症状、体征选择做心电图、B超、X线、CT、MRI、生化等检查。

　　二、鉴别

　　AH要与血友病甲、血友病乙等先天性凝血因子缺陷症、除FⅧ外的其他凝血因子的获得性抗体等疾病鉴别。除先天性凝血因子缺陷症患者可有家族史、自幼有关节等部位出血特点外，鉴别诊断主要依靠实验室的检查和相关凝血因子活性检测。

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