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婴幼儿轮状病毒感染的诊断

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　　1.实验室诊断：国内外对轮状病毒肠炎的实验室诊断，主要检测粪便中的轮状病毒抗原，常用的免疫方法有电镜法、放免法、酶标法、荧光法、对流免疫电泳法、乳胶凝集试验、SPA协同凝集试验等。近年随着分子遗传学等的发展，建立了更为特异和敏感的检测方法.如RNA核酸杂交，聚合酶链反应检测RV核酸存在及RNA电泳图形法。

　　1.1.一般检查：白细胞计数多正常，少数可轻度升高，分类以淋巴细胞升高为主。粪便常规检查多无异常，少数可见少量的白细胞。

　　1.2.病毒及其抗原检查：

　　1.2.1.电镜(EM)及用免疫电镜(IEM)：采用超薄切片电镜检查法，可直接观察病毒颗粒.也可以加抗轮状病毒抗体，观察凝集的病毒颗粒。此法在HRV诊断中有重要意义，阳性率可达70%左右。但由干受设备限制，较难推广。

　　1.2.2.酶免疫吸附试验(ELISA)：双夹心法是目前最为常用的ELISA法，即包被第一Ah(抗病毒Ab)+染测标本中Ag+检测Ab(豚鼠抗病毒lAh)+酶标Ab(单抗豚鼠Ab)+物，显色后读取结果。WHO将此法列为诊断RV的标准方法.国内外都已有ELISA HRV Kit销售，最近已生产出抗HRV的McAb。使ELISA的敏感度大大提高，而且特异型的MeAh可以分型研究。

　　1.2.3.放射免疫试验(RIA)：目前常用固相免疫测定法(SPEIA)首先用免疫RVIg(捕获Ab)包授微量板+含RV标本+豚鼠抗RVIgM。(检测Ah)+125I标记羊抗豚鼠IgG(指示Ab)，在计算机上测cpm值，此法已标准化，制成统一的微量板可快速地于l天内得到结论。

　　1.2.4.聚丙烯酰胺凝腔电泳(PAGE)：RV在粪便中含量高达10病毒颗粒/g，故可从粪便中直接提取dsRNA，其对RNA酶的降解有强的抵抗力，另外粪便中其他肠道病毒核酸不会进入用于检测RV dsRNA的聚丙烯酰胺凝胶，提取的dsRNA经10%PAFE分离，EB和AgNO3染色后，呈现RV特有的11条带。此法敏感，特异准确可靠，在诊断RV感絷、确定流行期病毒种类、病毒漂移和转变及基因重排分析等方面有重要的参考价值.

　　1.2.5.核酸探针杂交：首先扶标本中提取病毒dsRNA，其可在溶液中或在固相支持物上(如NC膜或尼龙膜)，与其互补的P2标记的DNA或RNA probe进行杂交，通过检测标记的probe观察是否有阳性杂交反应，杂交的敏感性与probe序列的长度成正比。

　　1.2.6.聚合酶链反应(PCR)：PCR自1985年南美国Cotus公司的Saiki等研究成功后，已被大量地用于检测人体内病毒核酸序列，具有敏感特异，简便和快速等优点，针对RV苯一基因的保守序列.合成两个引物，将抽提mRNA反转录后在体外扩增.如果得到特征性片段，则可证实RV的存在。国内外用PCR方法已对PV进行了上量的研究.不仅仅对RV进行检测.还进行RV和血清型鉴定。应用体外中和试验进行血清型鉴定要求每种病毒适于培养，并可被相应的血清所中和，目前尚不具有所有RV血清型的McAb，加之RV有VP4和VP7两个不同的中和抗原。因而用一般的免疫血请中和试验，酶免疫法(EIA)和免疫电镜(IEM)等都较困难，方法也较繁杂.而分别从编码RP4、VP7基因的分子水平设计的方法则比较简单易行。通过不同血清型VP7的氨基酸序列的比较研究，发现有6个区域的氨基酸排列具明显的多样性(变区)，另外6个区域氪基酸序列则具高度保守性，分析VP4的氪基酸序列也有类似的发现。所以分别设计反编码VP7和VP4基因的高保守序列设计引物，先经逆转录cDNA PCR一次放大后。再分别制造及基因内不同血清型的特征序列，设计一组分型引物，与另～端的保守序列引物酸对，经二次PCR放大，从放大产物的特征分子量大小，医别RV样品的不同血清型。

　　2.诊断和鉴别诊断：根据流行季节、发病年龄、临床表现及粪便特点作出初步诊断，特别是秋冬季婴幼儿腹泻、临床表现为黄色水样便者饕考虑本病。确诊依赖免疫电镜发现轮状病毒或病毒抗原或病毒核酸检测。医生可根据大便性状、粪便镜检、发病年龄及流行季节估计最可能的病原，水样便，小儿特别是2岁以下的婴儿，发生在秋冬季节，以轮状病毒肠炎的可能性最大。

　　本病还应与其他引起婴幼儿腹泻的病毒感染如埃可病毒、腺病毒等肠道病毒感染性腹泻进行鉴别。同时还要与大肠杆菌、沙门菌引起的感染性腹泻进行鉴别，

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