真菌过敏性哮喘 （哮喘）

　　1.真菌分类及其特征

　　真菌的种类很多，分布广泛，自然界中约有10万余种，受到地理，气候等因素的影响，大气中真菌的种类和含量变化很大，受到生活条件和生活习俗的影响，室内真菌的浓度也有很大的差异，致敏性强且空气中飘散数量大的真菌种类有数百种，引起人体致敏的主要是室内真菌，尽管空气中真菌的数量极大，形态各异，但它们都具有共同的特征，是具有丝状体的分枝状的营养结构，有细胞核和细胞壁，不含叶绿素，是典型地进行有性繁殖和无性繁殖的有机体，含有多糖和蛋白质等物质，根据现代分类学方法，真菌门下分为5个纲，与变态反应有关的共有4个纲。

　　(1)接合菌纲：本纲是较低等的一类真菌，也是数量最少的一个纲，其中毛霉科是该纲中最大的一个科，这个科中的毛霉，根霉，梨头霉，共头霉等，既是条件致病菌，也是引起变态反应的重要致敏真菌。

　　①菌丝多为管状，通常无横隔，有分枝，菌丝直径较大。

　　②无性繁殖时，在孢子囊中产生孢子。

　　孢子囊通常生在营养菌丝的顶端或是生在被称为孢囊梗的特殊繁殖菌丝的顶端，在孢子囊的幼期，其中充满着多核的原生质，当发育时，整个原生质割裂成许多小块，每个小块发育成为一个孢囊孢子，孢囊孢子主要靠风力传播，在适当的条件下，孢子萌发一芽管，进而发育成新的菌丝体。

　　③有性繁殖时，为配子或配子囊交配，然后形成休眠孢子，接合孢子。

　　(2)子囊菌纲：是真菌中比较大的一个纲，从它们的复杂结构看，较接合菌进化得多，而且很可能是从接合菌演变而来，如空气中常见的毛壳菌，蛹孢假壳菌，荚孢腔菌等。

　　①大多数种产生的子实体都含有子囊，子囊多为细长的棍棒形或圆筒形的袋状结构，少数为球形，卵形或长方形，通常子囊为一个腔，里面形成子囊孢子，也有的为分隔子囊。

　　②子囊内具有一定数量的孢子，通常为8个，但因菌种的不同，孢子的数目多少不完全一样，孢子的大小，形状，颜色及其他特征变化很大，一般以子囊孢子的特征作为子囊菌分属的依据。

　　③无性繁殖可通过分裂，芽殖，断裂，粉孢子，厚垣孢子或分生孢子等进行。

　　④有性繁殖是将两性的核结合起来，聚在一个细胞内，形成配偶，称双核期，经过连续的双核并裂产生许多双核细胞，双倍体的核在将要发育成子囊的子囊母细胞中结合后，立即进行减数分裂，产生8个核，从而形成典型的8个子囊孢子。

　　⑤许多子囊菌，每年只出现1次有性阶段，经常遇到的是分生孢子阶段。

　　(3)担子菌纲：这是真菌各纲中最高级的一个纲，如蘑菇，木耳，灵芝以及空气中极常见的黑粉菌，锈菌等都属于本纲。

　　①有特殊的产孢体，称担子，担子上有4个担孢子，担孢子的质配，核配和减数分裂发生在担子内，担孢子可以是圆形，椭圆形，狭长形或腊肠形，无色素或有色素，颜色浅淡，当孢子成团堆积时方可识别。

　　②无明显的生殖器官，两性的结合是由未经分化的菌丝的结合或孢子的结合，结合时只行质配，不行核配，结果有一个双核细胞期，并以特殊的锁状联合的方式形成新的双核细胞，两性细胞核在形成孢子之前才行核配，随之行减数分裂，产生单倍体的担孢子。

　　③无性繁殖借助于芽殖，菌丝体的裂殖或产生分生孢子和粉孢子，黑粉菌经常产生分生孢子，它的分生孢子是从担孢子和菌丝体两者芽殖而形成的，锈菌产生夏孢子，它在起源上和功能上是分生孢子，许多其他的担子菌也产生分生孢子，有些担子菌的菌丝体通常裂成单细胞段，这些菌丝体的碎片即粉孢子。

　　④有性繁殖是以体细胞配合或受精作用来实现的，在产生细胞的种内，2个单核细胞菌丝互相接触，接触点的胞壁溶化，一个细胞的核穿孔而进入另一个细胞内，使之成为双核，这个双核细胞连续分裂产生二生的双核菌丝体，在产生粉孢子的担子菌的种内，质配作用常在粉孢子和营养菌丝的联合时发生，总之，担子，双核菌丝体和锁状联合的形成，是担子菌的3个典型特征。

　　(4)半知菌纲：这一纲是尚未发现有性阶段的子囊菌及少数担子菌的分生孢子阶段的类群，它还包括一些在有性阶段发现前已经描述及定名的已知子囊菌及担子菌的无性阶段，如曲霉，青霉，芽枝菌，交链孢霉，木霉等。

　　①它们仅靠分生孢子或菌丝的碎片进行繁殖，分生孢子通常产生在分生孢子梗上，分生孢子梗的形态不一，它们的产生可以从普通的营养菌丝而来，无任何明显的器官，或者可以组成一定的子实体，最普通的子实体有分生孢子器及分生孢子盘。

　　②在它们的生活史中，仅发现了无性阶段，所以称之为半知菌。

　　③菌丝都有分隔，很多为腐生菌，但有许多对人类极为重要，是引起植物，动物和人类病害的寄生菌。

　　2.空气中气传真菌调查

　　空气中真菌的调查是探明各地空气中常见真菌种类，数量，季节分布情况的一种重要方法，这对于筛选致敏真菌，指导真菌变态反应患者的诊断和治疗有重要意义，制备真菌变应原的菌种的选择，就是根据空气中的调查资料配合真菌的致敏性来确定的，把空气中最常见，孢子播散数量最大和致敏性最强的真菌进行分离和筛选，保留纯菌种，进行实验室培养，可制备成各种真菌变应原浸液供临床诊断和免疫治疗。

　　一般认为，真菌调查由曝片和曝皿同步进行，由于曝片调查对某些较小的真菌孢子难以观察和分辨，所以曝皿调查也是非常重要的，通常调查应至少持续1年才能较为全面地了解该地区主要致敏真菌。

　　(1)空气中曝片及镜检计数方法：

　　①曝片方法：于空气中暴露涂有软凡士林黏附剂的载玻片(25mm×75mm)，将涂有黏附剂的载玻片放于取样器内，每天定时取放片，该片在空气中暴露24h，在取回的载玻片上放一块甘油胶染色剂，微溶后盖22mm×22mm的干净盖玻片，一般于次日进行镜检。

　　(1)空气中曝片及镜检计数方法：

　　①曝片方法：于空气中暴露涂有软凡士林黏附剂的载玻片(25mm×75mm)，将涂有黏附剂的载玻片放于取样器内，每天定时取放片，该片在空气中暴露24h，在取回的载玻片上放一块甘油胶染色剂，微溶后盖22mm×22mm的干净盖玻片，一般于次日进行镜检。

　　②镜检计数方法：镜检时，将载玻片放在显微镜载物台上，自左至右，慢慢移动推尺，到头后推尺轻轻上移，将载玻片推上一个新的镜检部分，再从右往左移动推尺，以此类推，顺序把盖玻片覆盖范围全部看完，详细记录真菌的种类与数量，某医院于1989-08-01～1990-07-31每天上午10点暴露涂有凡士林黏附剂的载玻片一张，24h取回，加1滴中性树胶，盖22mm×22mm盖玻片，全盖玻片镜检，记录真菌孢子，菌丝体数量，全年曝片365张，共收集真菌孢子10.1112万个，菌丝体片2367个，已鉴定真菌孢子10.1089万个，共37个种属。

　　(2)空气中曝皿及镜检计数方法：

　　①曝皿方法：将带有消毒培养基的平皿(直径10cm)在空气中暴露3～5min，暴露地点可根据需要而定，暴露完毕，将平皿放置在室温下或25℃恒温箱中培养，每天观察，记录生长的菌落及鉴定其名称，平皿应放置在固定地点，观察时要轻轻取放，防止真菌孢子被震落，造成培养基的污染而影响调查计数的准确性，一般以每周或每月曝皿一次，时间应与曝片一致，至少以1年为限。

　　②镜检计数方法：为了防止因某些真菌生长迅速，很快长满培养皿，影响其他真菌生长，孢子一旦生成，应马上进行分离鉴定并记录，一个菌落即作为一种真菌记录，统计时，菌落与真菌种类要分别计算，我院应用11cm培养皿，马铃薯葡萄糖，蔡氏，沙氏三种琼脂培养基在曝片处，医院门前广场和病区设置3个固定点曝皿，每点三皿，半月一次，每天上午10点曝皿3min，25℃生化培养箱内培养，每天观察，记录菌落数，直到无新菌落出现为止，挑取菌落用直接压片或载玻片培养方法于镜下鉴定，对已鉴定的真菌进行显微照相，并转入试管琼脂斜面培养和保存，全年曝皿24次，共216个琼脂平皿，收集菌落3012个。

　　3.真菌的变应原性研究

　　真菌和真菌孢子作为一种抗原物质，它在人体内产生抗体的能力比较低，可能由于真菌和真菌孢子不产生外毒素，亦无表面抗原存在;或认为真菌孢子的细胞膜上有一层化学稳定的物质，使细胞内的抗原成分不易释放，故激发抗体产生的功能较低，在临床上，真菌抗原浸液皮肤试验的强度与阳性率均明显低于花粉抗原浸液。

　　真菌诱发变态反应的过程与对结核菌诱发变态反应的过程相似，故采用真菌抗原浸液进行皮肤试验时，既可以出现速发相皮肤反应，又可以出现迟发相皮肤反应，有时为双相反应，我们曾对75例变态反应性结膜炎病例的皮肤试验结果进行了观察，真菌迟发相反应阳性率明显高于速发反应。

　　所谓致敏真菌，主要是一些植物病原菌和腐生菌，过去多数人认为真菌的主要抗原有效成分存在于真菌孢子中，后来有人发现，菌丝和孢子中都有致敏原，国内外许多实验室对数种真菌的变应原成分进行过研究，包括抗原的纯化，免疫检测分析等，Gravesen于1979年通过交叉放射免疫电泳分析，发现交链孢霉含有10种以上抗原成分，1980年Yunginger等对交链孢霉进行了生化分析，发现一种抗原性较强的糖蛋白，称之为Alt-1，其分子量在25000～50000之间，Aukrust等于1979年对芽枝霉的抗原性作了分析，发现含有60多种蛋白成分，其中有4种属于主要的抗原决定簇，其余部分为次要抗原决定簇，对其中2种抗原决定簇进行提纯，分子量为13000和25000，对10种不同种系的芽枝霉进行抗原性比较，发现不同种系中主要抗原决定簇的含量差别极大，1980年Kauffman等对烟曲霉的抗原成分进行分析，发现培养时间长的菌群比培养时间短的菌群抗原性高，1969年Pepys发现烟曲霉致敏后，发现其不但可以诱发机体产生特异性IgE，还可以产生特异性IgG，成为烟曲霉可以诱发变态反应性支气管肺曲菌病发病的重要依据，北京地区某医院曾于1984年开始对青霉，交链孢霉，曲霉等进行免疫电泳及琼脂扩散测定，发现了一些不同的区带，1986年对产黄青霉抗原进行了初步分离提纯，1986年北京医科大学对交链孢霉变应原进行了初步活性鉴定，发现了一种抗原性较强的成分，1987年Reed发现烟曲霉与土曲霉(A.Terreus)，棒曲霉(A.clavatus)，黑曲霉(A.niger)，黄曲霉(A.flavus)之间均有很高的抗原交叉性。

　　总之，气传真菌种类繁多，分布广泛，是诱发支气管哮喘的重要变应原之一，据报道美国现已进入市场的商品真菌变应原浸液制剂多达280余种，而我国目前应用于临床诊断和治疗的真菌抗原仅有20～30种，因此深入开展变应原分离提纯是今后我国真菌变态反应学研究的重要任务。