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肝病内毒素血症的诊断

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　　作为临床医师尤其是消化内科医师，有必要了解内毒素血症的有关诊断方法，以便对肝病病人的病情有一个全面的掌握，有利于对肝病进行综合性治疗。目前常用的LPS检测方法多基于卷试验(limulus test，LT)。鲎是一种海洋生物，其血液内含有一种变形细胞.此细胞内含有C因子、B因子、前凝固酶，能被内毒素激活而产生凝固效应。LT就是根据鲎血变形细胞提取液能被微量的LPS凝结的原理，通过检测凝胶的形成来检测内毒素含量。我国药典规定细菌内毒素的测定法为浊度法(turbidimetric tehnique)和显色法(chromogenic technique)。建立在免疫反应基础的检测方法也已逐步应用于临床。

　　1.浊度法 LPS与鲎试剂发生反应.激话凝固酶，形成凝固蛋白。用浊度仪可以定量检测到这种凝固过程中的浊度变化。此方法操作简单、灵敏度高。可检测出微量的内毒素(0.01～lug/L)。根据测定原理的不同。浊度法又可分为终点法和动态法。终点浊度法的原理是达到规定时间点上反应液的最终浊度值与细菌内毒素浓度成比例关系;动态浊度法的原理是达到事先设定的反应液浊度变化所需时间的对数值与细菌内毒素浓度的对数值成反比。浊度法有配套的仪器。已经广泛应用于临床及药物检测。

　　2.显色法LPS能激活鲎血变形细胞溶解物的凝固酶原，使之转化为凝固酶，后者能切断人工合成的鲎三肽中的精氨酸肽链，使其中所含的对硝基苯胺(PNA)游离显色，加入冰醋酸终止反应后用分光光度计在405nm处测定吸收光谱。从而定量检测内毒素含.量。

　　3.酶联免疫法(ELISA)

　　①利用针对LPS共同抗原(类脂A和KDO)的抗体具有广谱交叉反应的特性来检测抗-LPS抗体。由于类脂A或粗糙型LPS的疏水性强，不易溶解于缓冲液、包被于微量反应板上。因而抗原用量大，且影响了反应的敏感性。用多粘菌素B与LPS结合后，容易包被到塑料反应板上，且保留了LPS与其相应抗体结合的特性，提高了反应的敏感性和特异性。②也可将具有广谱交叉反应特性的抗LPS抗体包被于反应板上(即双抗体夹心ELISA)来定量检测LPS抗原。

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